Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的处理过程中逐渐扩展

从第一次不止现肾脏自身突变到不止现1M-白血病药理学征状的十分困难叛将在婴幼儿时期就有极好的详细描述，多个肾脏自身突变阴性的婴幼儿中都有70%在肝细胞匹配后10年内患上白血病，而随访15年的婴幼儿这一比重降低到84%。来得之下，占药理学1M-白血病一半以上的M-1M-白血病的胃癌机制还不能得到充分的数据分析。

越来越多的人开始用于分期系统来表述1M-白血病的十分困难：形态在不止现多种肾脏自身突变时转到第1先决条件，不止现血糖异常时转到第2先决条件，不止现征状时转到第3先决条件。一些多发肾脏自身突变阴性的形态，在1期和2期，十分困难较比较慢，并发展为胃癌的1M-白血病。我们之前详细描述了一两组在首次验证到多种肾脏自身突变样品后非常少10年无白血病的极比较慢十分困难者，这两组病患者人数少，但特性非常明确。随后，我们见到肾脏自身抗原特异性CD8+T细胞会反应在十分困难缓比较慢的病患者中都大体不存在，但在现先决条件胃癌和值得注意的白血病病患者中都很不易验证到。这或许说明，与十分困难病患者来得，这些病患者自身致病的适度增强。

早期数据分析说明，尽管适度性T细胞会(Treg)数量正常，但白血病病患者存在一些功能性毛病，其中都包含对IL-2的反应意志力降低。此外，白血病病患者中都的现像CD4+T细胞会或许对适度格外具抵抗性，乏善可陈为现像T细胞会的消除向西移动，自然消除的Treg和体外消除的诱导Treg，以及抗原境况的CD4+T细胞会中都IL-2反应向西移动。本数据分析的目的是详细描述了CD4+适度性T细胞会(Treg)在一小群极缓比较慢十分困难者中都的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

步骤：BOX数据分析是一项以人群有利于将的两端数据分析，在21岁以下胃癌的病患者家庭成员中都检查1M-白血病的凶险状况。我们之前详细描述了长期缓比较慢十分困难者的特性，他们保持多重肾脏自身突变阴性超过10年，但不能不止现白血病的药理学征状，比较慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名继续保持无白血病并愿意提供大量血液样品的缓比较慢十分困难者纳入T和B细胞会功能性分析。在在此之前的数据分析中都，8名比较慢十分困难者(SP两组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身突变阴性。所有的行动者都东南面1M-白血病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身突变对某些抗原的阴性反应，然而，一名病患者已经东南面2期非常少6年，但不能不止现药理学征状，一名病患者被病因为白血病，该受试者72岁，在热带植物试验性样品时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中都对该丝氨酸顺利进行了单独分析报告。转化外周血单个核反应细胞会(PBMCs)，有别于多参数流式细胞会心法和T细胞会消除试验性分析报告丝氨酸中都Treg的频带、遗传基因和功能性。用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)顺利进行无委派聚类分析，分析报告Treg遗传基因。

结果：与肥胖丝氨酸来得，来自比较慢十分困难体的思绪CD4+T细胞会的委派聚类表明，应答的思绪CD4+ Treg频带降低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关抗原(GITR)理解降低有关。一名HbA1c消退的病患者与十分困难缓比较慢者和匹配的支配两组来得，Treg可知相同。功能性分析说明，与肥胖丝氨酸来得，来自缓比较慢十分困难体的Treg介导的CD4+现像T细胞会消除轻微受损。乏善可陈为对现像CD4+T细胞会CD25和CD134理解的消除降低。

由此可知1 深入的遗传基因分析表明，CD4+Treg亚M-在比较慢十分困难函数调用中都降低。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标示物理解比对不止10个元簇:思绪T细胞会_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞会;HLA-DR + GITR +思绪T细胞会;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用于9个不同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个键值代表者一个集群(100个集群)，格外大的元集群(10个元集群)在键值两组周围剪裁。每个键值中都的糕由此可知暗示单个标示的理解级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以表明整体标示理解。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成由此可知，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对丰度为每个metacluster箱子两条路线由此可知(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞会(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞会(l)。红色格子代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用于CITRUS的预测模M-属实，Treg频带的降低是十分困难缓比较慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP行动者和匹配的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表者性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利进行转化，实时FlowSOM群体。(b) HD(白点)和SP(布氏)两组以及丝氨酸SP 606(红色)中都CD25+ cd127的频带核心内容由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控闭包的箱子两条路线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头突不止的簇被识别为SP和HD函数调用之间的不同。(j)箱子两条路线由此可知表明了在SP(布氏)和HD(灰点)两组中都，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对丰度(比重)。(k)直方由此可知表明每个簇的遗传基因(粉色)和Treg标示相对理解与取材理解(紫色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。取材与所有其他簇中都标示的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验

由此可知3 与肥胖献血者来得，十分困难缓比较慢者思绪treg的GITR降低。每个思绪CD4+T细胞会元簇(思绪T细胞会_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞会;HLA-DR + GITR +思绪T细胞会;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个理解标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的理解热由此可知(sp606不包含在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR理解串联，表明直方由此可知(c)和核心内容由此可知(d)。Wilcoxon配对小写秩和检验，p< 0.07(红色)所有丝氨酸包含，p< 0.05(紫色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包含在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR理解，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(红色)串联，表明直方由此可知(e)和核心内容由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩检验

由此可知4 来自缓比较慢十分困难的CD4+ treg细胞会支配现像CD4+T细胞会的意志力降低。SP两组用紫色的两条路线和格子暗示，HD两组用黑色的两条路线和格子暗示，红色的两条路线/格子暗示丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被标示为CFSE, Treg按观察的比重试样。用抗CD3 /28微珠还原细胞会，培植3翌日顺利进行流式细胞会心法验证。(a-d)与CD4+接收者者相对应的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百份。用于阴性对照(应答的响应细胞会包含treg)计算消除百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 现像CD4+T细胞会对缓比较慢十分困难的T细胞会还原的消除格外敏感。SP两组用紫色的两条路线和格子暗示，HD两组用黑色的两条路线和格子暗示，红色的两条路线/格子暗示丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标示，treg按观察的比重试样。用抗CD3 /28微珠还原细胞会，培植3翌日顺利进行流式细胞会心法(CD25反染)和特异性分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者协同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百分叛将(b)。(c,d) CD25消除百分叛将(c)和CD134消除百分叛将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中都的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们得不止的论断是，来自缓比较慢十分困难子的还原思绪CD4+Treg在GITR理解中都得到了扩张和丰富，强调了有利于数据分析Treg在1M-白血病风险形态中都的差异性的必要性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28